目的 研究周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制剂Roscovitine抑制HBV复制的分子机制.方法 首先通过构建SAMHD1蛋白dNTPase活性位点及T592磷酸化位点的突变体研究磷酸化负调控抑制作用;接着在肝癌细胞Huh7.0细胞中加入不同浓度的Roscovitine,通过MTT法检测了Roscovitine化合物对细胞毒性的影响;转染HBV复制质粒后,提取病毒核心颗粒DNA,通过Southern blot检测了Roscovitine对HBV的抑制作用,Western blot检测SAMHD1蛋白的磷酸化水平.结果 在增殖细胞中,SAMHD1 蛋白dNTPase活性突变体D207N丧失了对HBV的抑制作用;T592位点的去磷酸化增强了SAMHD1对HBV的抑制作用;Roscovitine的半数毒性浓度(TC50)为11.20 μmol/L,Roscovitine可以显著抑制SAMHD1的磷酸化和HBV的复制.结论 在增殖细胞中,SAMHD1蛋白T592位点的去磷酸化增强了其对HBV的抑制作用,Roscovitine可以通过抑制SAMHD1的磷酸化后抑制HBV的复制.
作者：胡杰；陈彦猛；乔淼；袁琳；周星；胡源
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2017 年 37卷 7期
