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目的 构建多发性骨髓瘤(MM)细胞与骨髓间充质干细胞(MSC)共培养体系,探讨共培养后MSC连接蛋白43 (CX43)表达及基质细胞衍生因子(SDF)-1α分泌水平变化及其意义.方法 用Western blot、免疫荧光法检测MM细胞系及MM原代细胞CX43的表达及SDF-1α分泌水平.建立间接及直接共培养体系共培养MM细胞和MSC,然后用CD138磁珠法分离RPMI 8226细胞及MSC.用实时定量PCR、Western blot法检测共培养前后MSC CX43表达,免疫荧光法检测CX43分布;划痕实验检测共培养后MSC间间隙连接通讯(GJIC)变化;微孑隔离实验检测18α-甘草次酸(18α-GA)对MSC诱导的RPMI 8226细胞迁移的影响.ELISA法检测共培养后的MSC SDF-1α分泌水平.结果 MM细胞系RPMI 8226、U266、1/3MM细胞及MM原代细胞CX43 mRNA呈中、低度表达,XG-4、XG-7细胞不表达CX43.骨髓MSC高表达CX43.直接或间接共培养后骨髓MSC的CX43 mRNA相对表达量明显提高,分别是单独培养时的1.36倍和2.10倍,Western blot检测显示共培养后MSC CX43蛋白表达水平也上调,免疫荧光染色显示增高的CX43主要分布在胞质.划痕实验显示在MSC与RPMI 8226直接共培养后荧光染料在细胞间扩散距离增加.MSC与RPMI 8226细胞直接和间接共培养体系中,MSC培养上清SDF-1α水平分别为(373.02±10.11)和(309.71±10.

作者:张晓慧;孙谕;王子妍;黄湛平;傅晋翔

来源:中华血液学杂志 2013 年 34卷 9期

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作者:
张晓慧;孙谕;王子妍;黄湛平;傅晋翔
来源:
中华血液学杂志 2013 年 34卷 9期
标签:
多发性骨髓瘤 间质干细胞 连接蛋白43 基质细胞衍生因子-1α 细胞运动 Multiple myeloma Mesenchymal stem cells Connexin 43 Stromal derived factor-1α Cell movement
目的 构建多发性骨髓瘤(MM)细胞与骨髓间充质干细胞(MSC)共培养体系,探讨共培养后MSC连接蛋白43 (CX43)表达及基质细胞衍生因子(SDF)-1α分泌水平变化及其意义.方法 用Western blot、免疫荧光法检测MM细胞系及MM原代细胞CX43的表达及SDF-1α分泌水平.建立间接及直接共培养体系共培养MM细胞和MSC,然后用CD138磁珠法分离RPMI 8226细胞及MSC.用实时定量PCR、Western blot法检测共培养前后MSC CX43表达,免疫荧光法检测CX43分布;划痕实验检测共培养后MSC间间隙连接通讯(GJIC)变化;微孑隔离实验检测18α-甘草次酸(18α-GA)对MSC诱导的RPMI 8226细胞迁移的影响.ELISA法检测共培养后的MSC SDF-1α分泌水平.结果 MM细胞系RPMI 8226、U266、1/3MM细胞及MM原代细胞CX43 mRNA呈中、低度表达,XG-4、XG-7细胞不表达CX43.骨髓MSC高表达CX43.直接或间接共培养后骨髓MSC的CX43 mRNA相对表达量明显提高,分别是单独培养时的1.36倍和2.10倍,Western blot检测显示共培养后MSC CX43蛋白表达水平也上调,免疫荧光染色显示增高的CX43主要分布在胞质.划痕实验显示在MSC与RPMI 8226直接共培养后荧光染料在细胞间扩散距离增加.MSC与RPMI 8226细胞直接和间接共培养体系中,MSC培养上清SDF-1α水平分别为(373.02±10.11)和(309.71±10.