目的 探讨NANOG基因在人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株中的表达及下调该基因表达对细胞凋亡的影响及可能机制.方法 利用RT-PCR及Western blot方法检测T-ALL细胞系MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat细胞NANOG基因表达情况.通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒,感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株,并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率.用流式细胞术检测各组细胞早期凋亡(Annexin V +/7-AAD-)及晚期凋亡(Annexin V +/7-AAD+)率,并利用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因的表达情况.结果 MOLT-4和CCRFHSB2细胞NANOG mRNA及蛋白表达阳性.构建慢病毒干扰质粒pLB-shNANOG-1、pLBshNANOG-2及pLB-shRNA对照,包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.83～ 3.12)× 108 IU/ml.病毒感染MOLT-4细胞后经实时定量PCR及Western blot方法证实两种shRNA可有效下调NANOGmRNA及蛋白的表达.流式细胞术检测显示shNANOG-1及shNANOG-2组细胞早期凋亡率分别为(8.06±1.61)％及(5.67±1.59)％,较MOLT-4组[(1.13±0.40)％]及对照shRNA组[(1.15±0.49)％]明显升高(P＜0.05).而各组细胞晚期凋亡率无明显变化(P＞0.05).实时定量PCR法证实shNANOG-1及shNANOG-2转染的细胞中TP53、PMAIP1、CASP9等基因表达较未转染组及转染非

作者：曹江；李莉；吕超；孟凡静；周俊；陈翀；曾令宇；李振宇；徐开林

来源：中华血液学杂志 2013 年 34卷 12期