目的 探索Trp1707Ser突变对重组凝血因子Ⅷ轻链(rFⅧLC)与血管性血友病因子(VWF)结合作用的影响机制.方法 以长链PCR法构建野生型和Trp1707Ser突变型rFⅧLC原核表达质粒,应用BL21原核表达系统进行蛋白表达,梯度复性法对表达蛋白进行结构复性,SDS-PAGE和Western blot对所得蛋白进行鉴定.复性后蛋白使用GST柱纯化并收集,表面等离子共振法(SPR)检测B区缺失重组FⅧ(BDD-rFⅧ)、野生型和突变型rFⅧLC与VWF的结合活性.结果 SDS-PAGE电泳和Western blot结果显示所表达蛋白(相对分子质量110×103)与目的蛋白相符.蛋白纯化峰图显示野生型蛋白表达量高于突变型.SPR检测结果显示BDD-rFⅧ、野生型rFⅧLC、突变型rFVⅧLC蛋白与VWF的结合活性均呈浓度依赖性增强.BDD-rFⅧ与VWF结合KD值(12.2)明显低于野生型rFⅧLC(48.9)和突变型rFⅧLC(46.3).结论 Trp1707Ser突变对原核表达rFⅧLC与VWF的结合作用无明显影响,重链对FⅧ与VWF结合作用的影响更为重要.
作者：迟昆；邵妍妍；陆晔玲；戴菁；丁秋兰；王学锋；王鸿利
来源：中华血液学杂志 2014 年 35卷 11期
