目的:观察前列腺素E2 (PGE2)4种受体(EP
1-4R)对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中炎症小体活化和细胞损伤作用。
方法:将hRMEC分为正常组、高糖组,分别置于含5.5、30.0 mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞仪观察高糖组、正常组的细胞凋亡率;酶链免疫吸附试验(ELISA)检测hRMEC细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞环氧化酶2 (COX2)、EP
1-4R的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hRMEC中EP
1-4R mRNA的表达。高糖组细胞培养后72 h后,将其再分为对照组、PGE2组、EP
1-4R激动剂组、PGE2+EP
1-4R抑制剂组、二甲基亚砜组。根据组别,各组给予相应的激动剂或抑制剂继续培养24 h。采用qRT-PCR检测各组细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白(NLRP3 )、白细胞介素(IL)-1β前体(pro-IL-1β)mRNA的表达;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western blot检测各组细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-1蛋白表达。同时对高糖环境的hRMEC给予IL-1β刺激24 h,检测其细胞培养上清液中LDH的活性。
结果:高糖组hRMEC细胞凋亡率、COX2蛋白表达、PG
作者:张忠红;姚勇;谢田华;吴美丽;邹健;王晓露
来源:中华眼底病杂志 2021 年 37卷 8期