目的克隆人多形性腺瘤基因1(pleomorphic adenoma gene 1, PLAG1)基因,构建PLAG1组织非特异性和特异性表达载体,并建立PLAG1转基因小鼠模型,阐明PLAG1基因的高表达与唾液腺肿瘤发生的关系.方法取PLAG1高表达的瘤组织或正常胎盘组织,提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)扩增获得PLAG1 cDNA全部编码框序列.将PLAG1分别克隆至pCMV-EGFP和pMMTV-EGFR-stop载体获得pCMV- EGFP/PLAG1和pMMTV-PLAG1表达载体.用pCMV- EGFP/PLAG1瞬时转染NIH3T3细胞以观察融合基因的表达及PLAG1的细胞内定位.经显微注射分别获得pCMV- EGFP/PLAG1和pMMTV-PLAG1转基因小鼠.结果从不同组织来源的RNA克隆的PLAG1 cDNA,经测序后发现与GenBank中的PLAG1基因(GenBank No. U65002)比较有一个碱基差,相应氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸.构建的组织非特异性表达载体pCMV-EGFP/PLAG1和组织特异性表达载体pMMTV-PLAG1经酶切和测序鉴定,证实PLAG1序列及插入方向正确.用pCMV-EGFP/PLAG1转染NIH3T3细胞,在细胞水平证明PLAG1的表达及其在细胞核的定位.两种表达载体分别经显微注射,获得了多个转基因阳性小鼠(Founders, G0代),经交配繁育,建立了相应的转基因小鼠系.转基因的表达分别经RT-PCR和Norther

作者：赵旭东；杨雯珺；王龙；孔辉；任维华；张梅；费俭；张陈平；王铸钢

来源：中华医学遗传学杂志 2003 年 20卷 5期