目的 构建含CDglyTK基因和靶向干扰信号转导和转录激活因子3(STAT3)基因的真核表达载体,探讨多基因联合治疗对结肠癌细胞的抑制作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法,扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和带状疱疹病毒胸苷激酶(TK)基因,经测序、酶切、连接、转化、提取筛选的重组质粒.采用酶切和PCR电泳法鉴定所构建质粒.构建靶向STAT3基因shRNA真核表达质粒.将重组质粒转染HCT116和HUVEC细胞,采用RT-PCR检测CDglyTK基因表达和干扰STAT3基因的效果.采用Western blot法检测干扰STAT3蛋白表达的水平.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测前药对转染了重组质粒pEGFP/CDglyTK、pEGFP/STAT3 siRNA的HCT116和HUVEC细胞的抑制率.结果 重组质粒pEGFP/CDglyTK经限制性酶切、PCR电泳法鉴定分析显示质粒构建正确.RT-PCR法从转染了重组质粒pEGFP/CDglyTK的HCT116和HUVEC细胞中扩增出CDglyTK片段.RT-PCR和Western blot结果显示,转染了pEGFP/STAT3 siRNA的HCT116细胞株的STAT3基因表达水平降低.MTT法检测显示,前药对HCT116细胞的pEGFP/CDglyTK组的抑制率为(63.72±0.64)
作者：陈建勇；罗斌；郭晓白；万里晖
来源：中华肿瘤杂志 2011 年 33卷 2期
