目的 构建携带胰岛素样生长因子2(IGF2)印迹系统的重组腺病毒,探讨其用于肿瘤靶向治疗的可行性.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增H19 enhancer、DMD以及H19启动子序列,并克隆至pDC-312中；扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和白喉毒素A(DT-A)片段,分别插入到构建好的重组质粒中,构建成重组腺病毒穿梭质粒.重组腺病毒穿梭质粒与Ad5共转染,产生重组腺病毒Ad-EGFP和Ad-DT-A.以Ad-EGFP分别感染正常IGF2印迹(MOI)细胞GES-1和MCF-7以及IGF2印迹丢失(LOI)细胞HCT-8,荧光显微镜下观察各组细胞中EGFP的表达.通过检测腺病毒衣壳蛋白hexon基因的表达证实腺病毒的感染,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测Ad-DT-A感染后各组细胞中DT-A基因的表达；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测Ad-DT-A体外抗肿瘤效应.构建皮下移植瘤裸鼠模型,研究Ad-DT-A在体内的抑瘤作用.结果 所构建重组腺病毒Ad-EGFP感染各组细胞后,EGFP蛋白仅在IGF2 LOI细胞HCT-8中表达.各组细胞经Ad-DT-A感染后,DT-A基因仅在HCT-8细胞中表达；且HCT-8细胞以每个细胞10 PFU的Ad-DT-A感染72 h后,其增殖活力降低至(75.4±6.4)％,凋亡率升高至(20.8±5.9)％.Ad-DT-A多点注射入HCT-8移植瘤内,Ad-DT-A能够有效抑制移植瘤的生长,抑瘤率达36

作者：潘玉琴；何帮顺；朱蝉；渠利利；徐勇飞；王书奎

来源：中华肿瘤杂志 2011 年 33卷 11期