[目的]克隆人类DNA聚合酶(pol-β)基因全长cDNA,构建该基因的真核高效表达载体.[方法]抽提人胚肺纤维细胞HLF总RNA进行RT-PCR扩增,用pGEM-T载体经T/A克隆、DNA测序确定后,用双酶切将pol-β全长cDNA定向克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1,转染大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,双酶切鉴定重组质粒.[结果]经RT-PCR获得1.03 kb的产物,经DNA测序,确定所扩增片段为人类pol-β基因全长cDNA,进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-C1-β.[结论]成功构建人pol-β基因全长cDNA真核表达载体,为进一步建立该基因的高表达细胞株提供基础.
作者：杜柳涛；庄志雄；高昆；杨杏芬；何云；徐雷；魏青
来源：中山医科大学学报 2002 年 23卷 3期
