[目的]制备并纯化 Wilson蛋白 (ATP7B)的 N端多克隆抗体,为进一步研究其基因表达蛋白的结构和功能打下基础.[方法]RT-PCR扩增目的基因, GST基因融合载体表达融合蛋白 , 亲和层析进行蛋白纯化, Thrombin酶切并收集目的蛋白,免疫家兔, ELISA 检测抗体滴度 , 离子交换层析纯化抗体血清, Western blot检测抗体特异性.[结果]ELISA方法检测抗体滴度达到了 1∶ 2 500, Western blot表明该抗体有很好的特异性,非变性 SDS-PAGE显示纯化后的抗体 IgG纯度很高.[结论]应用该方法成功制备了 Wilson病蛋白质量的多克隆抗体.
作者：王莹；丰岩清；国宁；黄帆；徐琳；陈曦；梁秀龄
来源：中山大学学报(医学科学版) 2003 年 24卷 6期
