[目的]探讨乙酰胆碱(Ach)对抗氯化钴(CoCl2)诱导H9C2心肌细胞缺氧损伤的作用及其分子机制.[方法]应用600 μmol/L CoCl2处理H9C2心肌细胞12h以建立缺氧损伤细胞模型,应用ACh 10-3 mol/L预处理8h建立心肌细胞保护模型,实验分为①空白对照组(control);②损伤模型组(CoCl2 600 μmol/L);③ACh预处理组(ACh 10-3 mol/L+ CoCl2 600 μmol/L);④α7胆碱能受体(α7nAChR)拮抗剂组:ACh+甲基牛扁碱柠檬酸盐(MLA)+ CoC12组(ACh 10-3 mol/L+ CoCl2 600 μmol/L+MLA 10-6mol/L).应用CCK-8试剂盒检测细胞存活率.双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(ROS)水平.JC-1荧光显微镜照相法检测细胞线粒体膜电位水平改变.Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的形态及数量的变化.Fluo4-AM荧光显微镜照相法测定细胞胞质内钙离子水平的改变.Western Blot检测Drp1、caspase-3蛋白水平.[结果]600 μmol/L CoC12处理显著损伤H9C2心肌细胞,线粒体膜电位丢失,ROS生成、细胞凋亡率、胞内钙离子显著增加(P＜ 0.001),明显上调Drp1、caspase-3表达水平(P＜0.001);应用ACh预处理可明显提高H9C2心肌细胞存活率(P＜ 0.001),ROS水平下降,线粒体膜电位丢失减少(P＜ 0.001),细胞凋亡率、胞内钙离子明显下降(P＜ 0.

作者：吴涛；耿登峰；符宇；高佳佳；谈智

来源：中山大学学报（医学科学版） 2016 年 37卷 5期