目的:建立流式细胞术检测细胞内磷酸化蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的方法.方法:用佛波醇酯(PMA)及植物血凝素(PHA)刺激Jurkat细胞,用两种不同的固定和透膜方法处理细胞,加磷酸化PTKs特异性单抗P-Tyr-100及FITC标记的二抗,建立胞内磷酸化PTKs的流式细胞检测技术;同时,用免疫印迹方法检测磷酸化PTKs以资对照.用双色荧光技术,对结核杆菌抗原(Mtb-Ag)活化的外周血单个核细胞(PBMC)中的γδT细胞进行胞内PTKs分析.结果:PHA及PMA刺激能够使Jurkat细胞中磷酸化PTKs明显增加,流式细胞术与免疫印迹方法检测的结果一致.通过双色荧光技术检测发现,Mtb-Ag刺激PBMC,可以优先诱导γδT细胞胞内PTKs的活化.结论:利用流式细胞术可在单细胞水平分析细胞内PTKs的磷酸化状态.
作者：吕合作；李柏青
来源：蚌埠医学院学报 2005 年 30卷 2期
