目的:为了研究人成骨细胞特异因子-2(periostin,POSTN)基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响,构建shRNA质粒和慢病毒载体,观察其对293T细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞的POSNT基因表达的抑制作用,检测shRNA慢病毒载体对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响.方法:设计特异性干扰人POSTN基因的小发卡RNA序列,合成含有干扰序列的双链DNA oligo,与经双酶切后的质粒连接,转化感受态大肠杆菌DH5α并对阳性克隆进行PCR扩增测序鉴定.将构建的质粒采用脂质体共转染入293T细胞,36～48 h后采用Western blot的方法检测目的蛋白的表达情况,进而判断不同靶点的干扰效果.将干扰效果最好的序列包装shRNA质粒和慢病毒载体,利用生成的POSTN shRNA质粒和慢病毒分别感染293T细胞和原代瘢痕疙瘩成纤维细胞,检测两种细胞目的基因、蛋白的表达,进而观察基因干扰后瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖变化.结果:转染干扰质粒原代瘢痕疙瘩成纤维细胞、感染空质粒阴性对照细胞和正常皮肤成纤维细胞的POSTN mRNA表达分别为1.98±0.03、1.12±0.03和1.08±0.03,实验组对比阴性对照组细胞的敲减率为43
作者：刘畅；宋振华；秦泽莲
来源：北京大学学报（医学版） 2010 年 42卷 5期
