目的 构建能高效敲减分化抑制因子2 (Id2) 基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,并观察敲减Id2对胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 设计并合成特异性针对Id2基因的shRNA序列,将其构建到慢病毒载体pGCSIL-GFP中.以含有Id2基因的质粒为模板,扩增Id2基因cDNA序列的特异性片段,插入真核表达载体pEGFP-N1-3FLAG.构建含Id2基因质粒和不同靶点的RNAi慢病毒载体,共转染入工具细胞293T,筛选出适合浓度慢病毒感染U251细胞株.MTT法检测敲减Id2后胶质瘤细胞增殖的改变,RT-PCR检测Id2敲减后U251细胞caspase 3的表达.结果 构建后载体的PCR鉴定及DNA测序结果与预期一致.与对照组相比,转染Id2 shRNA的U251细胞增殖降低,凋亡率升高,caspase 3表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建的针对Id2基因的RNA干扰慢病毒载体体外转染可抑制胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡.
作者：赵振宇；贺华；卢亦成；陈菊祥；侯立军；胡国汉；骆纯
来源：第二军医大学学报 2011 年 32卷 6期
