目的 探讨神经突触核蛋白-γ (SNCG)基因沉默对恶性胶质瘤细胞U87-MG增殖和凋亡的作用.方法 设计并合成5条特异针对SNCG基因的siRNA Oligo片段,将目的片段插入至慢病毒干扰载体系统中,经感受态细胞转化、PCR鉴定挑选阳性克隆测序后与慢病毒干扰载体共转染至293T细胞包装病毒.重组慢病毒载体感染U87-MG细胞后,采片实时定量RT-PCR法检测siRNA对SNCG基因表达的抑制作用,筛选出最优siRNA序列用于后续研究.分别采用克隆形成实验评价细胞生长能力,流式细胞术检测细胞周期、细胞增殖能力以及细胞凋亡水平的变化.结果 成功构建5种特异针对SNCG基因的慢病毒干扰载体(SNCG siRNA 1 ～5),其中重组慢病毒株SNCG siRNA 3和siRNA 5沉默效率最为明显.与阴性对照组比较[(1.00±0.10)％],SNCG siRNA 3和siRNA 5均能显著下调SNCG mRNA表达[mRNA相对表达量:siRNA 3(0.17±0.01)％、siRNA 5(0.13±0.01)％,P＜0.05];细胞克隆形成能力被明显抑制[细胞集落数量:siRNA 3(66±12)、siRNA 5(1±1)、阴性对照组(80±5),P＜0.05];细胞增殖能力被明显抑制[S期细胞比例:(41.2±0.7)％、(39.9±0.5)％、阴性对照组(47.6±2.2),P＜0.05];凋亡细胞明显增加[细胞凋亡率:siRNA3(22.9±0.4)％、siRNA 5(28.6±0.9)％、阴性对照组(1.1±0.1)％

作者：程世翔；衣泰龙；徐忠伟；孙洪涛；涂悦；张赛

来源：中华行为医学与脑科学杂志 2015 年 24卷 11期