目的 构建表达氧化还原因子-1(APE/Ref-1)基因的复制缺陷型重组腺病毒,为进一步研究APE/Ref-1在耳蜗螺旋神经节氧化损伤病理过程中的作用机制提供实验基础.方法 应用RT-PCR 技术从大鼠脑组织总RNA克隆出APE/Ref-1 基因, 将APE/Ref-1 基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293 细胞进行包装,并反复感染293细胞进行扩增.对其进行安全性、滴度以及活性等检测.采用Western blot 对APE/Ref-1蛋白表达进行检测和鉴定.结果 克隆出大鼠APE/Ref-1基因,经测序证实结果正确;得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA证实含目的基因.结论 成功构建了表达APE/Ref-1 的复制缺陷型重组腺病毒.为进一步研究APE/Ref-1在耳蜗螺旋神经节的氧化损伤过程中作用机制奠定了实验基础.
作者：姜振东；魏运军；张学渊；邓凤莲；卓贤露
来源：第三军医大学学报 2006 年 28卷 16期
