目的 探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用.方法 预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C 1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中,检测细胞中的双荧光素酶活性.采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2,PCR扩增CDX2启动子的特异性序列.结果 转录因子数据库预测到CDX2近端启动子区含多个E-box结合位点和潜在的Nkx-2、GATA-1、CdxA、Sox-5、SRY等顺式作用元件.双酶切及测序结果证实pGL3-CDX2-C1-8重组质粒插入片段序列均正确.重组质粒在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中的荧光素酶活性明显高于shRNA-Ctr/LS174T细胞(P＜0.01).随着CDX2启动子片段的缩短,荧光素酶活性呈升高趋势.ChIP实验证实在CDX2近端启动子存在与Ascl2相结合的片段,在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中,Ascl2与CDX2启动子区域中-841 ～-646、-291 ～-134、-7～+138片段结合的DNA片段明显少于对照shRNA-Ctr/LS174T细胞.结论 Ascl2在结肠癌上皮细胞中可能通过与CDX2近端启动子的直接结合而达到转录阻遏CDX2基因表达的目的.

作者：钟小莉；尚杨杨；潘琼；李姗姗；刘韵；叶钧；宋丽丽；赵晶京；彭志红

来源：第三军医大学学报 2014 年 36卷 18期