目的:克隆人肝癌细胞的LASP1基因的启动子区域并找出该基因启动子的核心调控区域.方法:提取肝癌HepG2细胞总DNA,PCR扩增不同长度的LASP1启动子片段,克隆至PGL3-Basic载体中构建重组表达载体PGL3-P1 (2059 bp)、PGL3-P2(1123bp)、PGL3-P3(909 bp)、PGL3-P4(574 bp)和PGL3-P5 (159 bp),转化入大肠埃希菌(E.coh)DH5α中,提取质粒经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆并测序.将构建的重组表达载体、PGL3-Basic载体分别与内参质粒PRL-Tk共转染HepG2细胞,48 h后经双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性.结果:PCR结果、双酶切结果以及DNA测序结果表明成功构建了LASP1启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与PGL3-Basic组相比,重组载体PGL3-P1、PGL3-P2、PGL3-P3、PGL3-P4均具有较强的启动子活性(P＜0.01),其中,PGL3-P4的活性最强.结论:成功构建了人肝癌细胞不同截断长度的LASP1基因启动子荧光素酶报告基因载体,确定了LASP-1基因启动子的核心区域(-581 bp～-8 bp),为进一步研究LASP1基因在肝癌细胞中表达的关键调节因素及分子机制奠定了基础.
作者：胡磊；罗文雅；胡威；尤红娟；孔凡运；李向阳；郑葵阳；汤仁仙
来源：现代生物医学进展 2016 年 16卷 4期
