目的通过对抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因3～5号外显子缺失后连接片段的克隆和测序分析,探讨dystrophin基因缺失的发生机制.方法先以外显子PCR反应检测证实1例杜氏肌营养不良症患者3～5号外显子缺失,然后在2、5号内含子上用PCR步移方法寻找断裂位点,最后用靠近断裂位点处设计的引物,以PCR法直接扩增dystrophin基因的缺失连接片段并测序,测序结果和正常内含子序列作对比分析.结果获得2113 bp PCR产物,本例基因缺失片段长约49 000 bp.5'端断裂点位于2号内含子短散在元件Alu序列内,3'端断裂点在单一序列,附近有TTTAAA序列.断裂点附近有较强的拓扑异构酶Ⅱ酶切位点.连接片段插入了26bp序列并在断裂点周围形成3个13bp的短序列重复(GGCTTATATTTAA)连接断裂点两端.结论推测重复序列、断裂点附近较强的拓扑异构酶Ⅱ酶切位点关联易引起基因的断裂重组,加上非同源末端连接修复机制等综合因素可能是导致基因缺失的重要原因.
作者：钟敏；潘速跃；陆兵勋；姜立；李伟
来源：南方医科大学学报 2006 年 26卷 6期
