为了解Dystrophin基因缺失断裂点和连接片段的序列特点,以分析Dystrophin基因缺失的分子机制,利用巢式反向PCR克隆了1名51号外显子缺失DMD(Duchenne Muscular Dystrophy, DMD)患者的缺失连接片段,通过测序,确定5′和3′断裂点及连接片段的序列.对5′、3′断裂点和连接片段进行重复序列、TOPOI、TOPOII酶切位点等分析.结果共测得50号内含子1?614bp,确定该患者Dystrophin基因的5′断裂点位于THE1(Transposon-like Human Element, THE)内,3′断裂点位于L2序列内.连接片段有3bp的连接同源序列cta,局部无小的缺失、插入和碱基置换.本研究首次在50号内含子内发现一THE1序列,再次发现Dystrophin基因的缺失断裂点位于THE1结构内.反向PCR操作简单、耗时短,可以推扩应用于缺失连接片段的克隆;THE1可能与部分Dystrophin基因的缺失有关;Dystrophin基因缺失大多与同源重组无关,非同源末端连接可能参与了Dystrophin基因缺失的形成.
作者：潘速跃；张成；刘焯霖；陈国俊；卢锡林
来源：遗传学报 2002 年 29卷 2期
