目的 探讨过表达IL-12的恶性黑色素瘸细胞B16对肿瘤免疫微环境重建过程中T细胞表面PD-1表达水平的影响.方法 利用慢病毒感染小鼠黑色素瘤细胞B16以构建稳定过表达IL-12的B16细胞株;利用qRT-PCR、ELISA检测IL-12的表达情况;通过平板细胞克隆形成实验验证转染病毒对B16细胞增殖能力的影响;利用ELISA检测B16/IL-12细胞在体内表达IL-12的能力;将健康的C57BL/6小鼠随机分为2组,分别接种B16细胞及B16/IL-12细胞,14d后用流式细胞术检测肿瘤引流区淋巴结中高表达PD-1的T细胞比例;利用650cGy剂量的放射线照射C57BL/6小鼠以构建免疫重建模型,并将造模后的小鼠随机分为2组,分别接种B16细胞及B16/IL-12细胞,将未接受放疗处理的小鼠作为对照组接种B16细胞,记录各组小鼠肿瘤生长情况,接种细胞14d后用流式细胞术分别检测肿瘤引流区淋巴结以及肿瘤组织中PD-1+T细胞比例.结果 B16/IL-12细胞相比于B16细胞显著增加IL-12的表达(P＜0.001);转染IL-12过表达慢病毒并未对B16细胞增殖能力造成显著影响(P＞0.05);接种B16/IL-12细胞的何瘤小鼠在其肿瘤组织中含有更高水平的IL-12(P＜0.01);常规荷瘤小鼠模型中,B16/IL-12组小鼠较B16组小鼠具有更低比例的CD4+PD-1+T细胞(P＜0.01),而CD8+T细胞群中,PD-1表达水平差异不显著(P＞0.05);
作者：刘严友葓；徐虹铃；赖楠；杨子科；康世均
来源：南方医科大学学报 2020 年 40卷 6期
