背景与目的:化疗是鼻咽癌最主要的辅助治疗手段,然而癌细胞耐药性的产生常常导致药物治疗的失败,因此,筛查鼻咽癌耐药相关基因、寻找逆转药物耐受的分子靶点具有重要的现实意义.本研究首先用鼻咽癌药物敏感细胞 CNE2作为亲本细胞诱导建立耐药细胞系,并在此基础上,筛选鼻咽癌耐药相关基因,探讨耐药性产生的分子机制.方法:以顺铂( cisplatin,DDP)为诱导剂,采用大剂量冲击与剂量逐渐递加相结合的方法,诱导建立人鼻咽癌耐药细胞系 CNE2/DDP.采用 MTT法测定药物的敏感性、流式细胞术测定细胞周期及细胞内荧光药物罗丹明的蓄积,并进行细胞生长曲线测绘、倍增时间测定及细胞形态学观察.随后,采用基于 PCR技术改良的消减杂交法筛选并克隆耐药相关基因.反向点杂交鉴定排除假阳性, DNA测序分析差异表达片段, RT- PCR对差异表达的基因片段做进一步验证.结果:所建立的人鼻咽癌耐药细胞系 CNE2/DDP对 DDP的耐药指数为 27.9,对 5-氟尿嘧啶( 5- fluorouracil,5- FU)及长春新碱( vincristine,VCR)的耐药指数分别可达 227.9和 55.5,表明其具有多药耐药的特征.流式细胞测定显示耐药细胞内罗丹明的蓄积明显低于敏感细胞( 12.98 vs. 243.62).镜下观察耐药细胞体积变小,形态变圆,细胞倍增时间明显延长( 26 h vs. 19 h).消减杂
作者：姜润德；张立新；岳文；朱运峰；路浩军；刘昕；岑信棠；关新元；李春海
来源：癌症 2003 年 22卷 4期
