研究目的是构建急性白血病多药耐药相关消减cDNA文库,以用于白血病多药耐药(MDR)相关基因的筛选.采用改良的消减杂交方法建立急性白血病耐药细胞差异表达基因cDNA文库,提取HL-60/VCR与HL-60细胞mRNA,将HL-60/VCR细胞mRNA用Cap-Finder法反转录成cDNA,与以常规反转录的HL-60细胞cDNA为模板,PCR合成生物素标记的扣除探针进行杂交.杂交产物用Sephacryl S-400柱和具有链亲和素作用的磁珠纯化后,得到差异表达cDNA.PCR法特异扩增,进行T-A克隆建成消减cDNA文库,并通过反向点杂交鉴定其质量.结果表明:构建急性白血病多药耐药相关消减cDNA文库所需样本量少且时间短,全长或近全长的cDNA分子较多(约达总数的2/3),质量较高.结论:成功构建急性白血病多药耐药相关消减cDNA文库,为筛选白血病耐药相关基因奠定了基础.
作者：吉蕾；张王刚；刘捷；刘新平；药立波
来源：中国实验血液学杂志 2004 年 12卷 4期
