目的 构建人GM-CSF基因的重组腺病毒载体,探讨其在树突状细胞(DC)中的表达.方法 设计一对GM-CSF基因上下游引物,以质粒pBlu-hGM-CSF为模板,经PCR扩增获得GM-CSF基因全部序列.片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pshuttle-CMV-GM-CSF.经双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,将2种重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体转染293细胞.制备病毒上清并测定其滴度,并感染人树突状细胞.结果 完成构建含有人GM-CSF基因的重组腺病毒,病毒滴度Ad-GM-CSF 5.2×109pfu/mL.RT-PCR及ELISA检测证实GM-CSF在DC中表达.结论 构建重组腺病毒载体,并在DC表达GM-CSF抗原蛋白.
作者：朱雄鹏；陈志哲；林旭；胡建达；李纯团；许贞书；杨婷
来源：福建医科大学学报 2006 年 40卷 5期
