目的:构建海马神经元离体氧糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞模型,探讨miR-146b抑制(anti-miR-146b)对海马神经元缺血/再灌注损伤的凋亡抑制作用.方法:原代培养大鼠海马神经元,建立OGD/R细胞模型,应用anti-miR-146b慢病毒转染抑制miR-146b表达,将细胞分为正常组 、OGD/R组和OGD/R+anti-miR-146b组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-146b、KLF7及凋亡相关蛋白Caspase-3,Bcl-2和Bax mRNA表达变化.CCK8法检测各组细胞活性,Hoechst33342/PI双染法检测各组细胞凋亡情况.结果:与正常组比较,OGD/R组和OGD/R+anti-miR-146b组细胞形态受损,细胞活性显著下降,细胞凋亡率显著增高,其中OGD/R+anti-miR-146b组较OGD/R组细胞形态显著改善,细胞活性显著增高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05).与正常组比较,OGD/R组和OGD/R+anti-miR-146b组miR-146b、KLF7、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA表达水平显著增高,其中OGD/R+anti-miR-146b组KLF7和Bcl-2 mRNA表达显著高于OGD/R组,而miR-146b、Caspase-3和Bax mRNA表达则显著降低(P<0.05).结论:anti-miR-146b对OGD/R诱导的海马神经元缺血/再灌注细胞损伤具有保护作用,其机制可能与上调KLF7信号通路,下调Caspase-3和Bax表达,上调Bcl-2表达,抑制OGD/R诱导的细胞凋亡途径有关.
作者:李雪花;王莹;孙广大;李兴江;赵庭琪;李文媛
来源:海南医学院学报 2018 年 24卷 20期