目的:克隆和表达结核分枝杆菌抗原 MPT64,并分析其免疫活性。方法:以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组 DNA 为模板,PCR 扩增 mpt64基因,克隆至 T 载体 pMD18-T,转化入 E.coli DH5α,菌落 PCR 鉴定阳性克隆并测序分析。将测序正确的 pMD18-T-mpt64的 mpt64基因亚克隆至表达载体 pET-28a,构建重组质粒 pET-28a-mpt64,转化 E.coli BL21中,PCR 和双酶切鉴定阳性重组子,IPTG 诱导 MPT64表达,亲和层析纯化,western-blot 分析其免疫活性。结果:成功构建 pET28a-mpt64重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约为26kDa 的 MPT64,并能被结核病人血清识别。结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌 MPT64蛋白。
作者:蒋华科;袁仕善;谢琳;郭靖玮;任琪琪
来源:湖南师范大学学报(医学版) 2016 年 13卷 2期