目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal anti-body,mAb),并分析mAb的特异性.方法 PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白.重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系.以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb.ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性.结果 本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了 MPT64蛋白.亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白.该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2.中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb.该mAb的亲和力为2.813×10-7 g/mL,属于IgG 1亚类.MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白.结论 本研究制备了 MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础.
作者：谢燕玲；宁唤唤；梁璇；康健；任瑞；张慧；张娜娜；路延之；柏银兰
来源：中国人兽共患病学报 2022 年 38卷 5期
