目的 构建重组人血清白蛋白促红细胞生成素融合蛋白(HAS-EPO)表达载体,用CHO细胞表达该重组蛋白.方法 PCR扩增出人血清白蛋白基因(HAS)和促红细胞生成素基因(EPO);合成编码多肽GS (GGGGS)3的DNA片段作为接头(Linker),采用重叠PCR的方法将Linker与EPO基因拼接成LEPO基因.HAS与LEPO基因通过BamH I酶切位点相连成HAS-EPO融合基因;将该融合基因插入表达载体pCI-neo构建为表达质粒pCI-HLE.脂质体转染CHO细胞,以G418抗性筛选转染细胞.用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞,以ELISA方法检测被转染CHO细胞表达情况.结果 酶切及测序结果证实pCI-HLE构建成功.PCR检测表明融合基因已转入CHO细胞;Western blot结果表明融合基因成功表达,并具有EPO免疫原性.ELISA测活显示融合蛋白体外活性在86～637 IU/(mL·106·72 h)之间.结论 pCI-HLE真核表达载体可以在CHO细胞中成功表达具有EPO免疫原性的HAS-EPO融合蛋白,为开发长效EPO奠定基础.
作者：黄迎春；苟兴华；韩蕾；李德华；赵兰英；吴洽庆
来源：四川大学学报（医学版） 2011 年 42卷 3期
