目的 研究钙释放激活的钙调素2(Orai2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用.方法 1)用转染技术将构建的Orai2干扰质粒(Orai2shRNA)转染人HUVEC,用实时定量RT-PCR和Western blot检测Orai2 mRNA和蛋白的表达.2)取2～5代HUVEC,分别以精胺激活CaR(钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活)、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex231(激活ROC及阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(阻断ROC及激活SOC)为细胞模型.实验分为3组:特异性质粒转染组(Orai2shRNA组),未转染组(空白对照组),空质粒组(vehicle组),用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO的生成.结果 1)与control组相比,shOrai2-71干扰后,Orai2 mRNA和蛋白的表达均明显降低,抑制率分别为75.75％和70.58％ (P ＜0.05).2)与对照组和空质粒组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai2shRNA转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05).结论 Orai2参与了HUVEC中CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成.

作者：王腊梅；钟华；赵慧；王静；庞丽娟；孙志萍；何芳

来源：基础医学与临床 2014 年 34卷 5期