目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响.同时,筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点.方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列(-1744nt ～-14nt)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,获得CCL5基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-CCL5-FL).然后,将pGL3-CCL5-FL与大鼠野生型KLF6表达质粒(pIRES2/KLF6)共转染GMC,测定其荧光素酶活性.另用生物信息学软件预测CCL5基因启动子上KLF6潜在的结合位点,并据此构建出4个CCL5基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-CCL5-1～4).将上述CCL5基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒分别与KLF6过表达质粒共转染GMC,再行荧光素酶活性的测定,初筛KLF6可能的结合部位.结果:菌液PCR以及核酸测序结果证实,上述所有启动子荧光素酶报告质粒均构建成功.pGL3-CCL5-FL和pIRES2/KLF6共转染GMC结果显示,CCL5基因启动子的活性显著增强.pGL3-CCL5-FL、pGL3-CCL5-1～4分别与pIRES2/KLF6共转染GMC后发现,pGL3-CCL5-4的启动活性显著降低.提示KLF6可能结合在CCL5基因启动子的-343nt ～-191nt

作者：刘玉；虞天一；张婧；何风霞；卢燕来；周梦雅；王璐璐；赵聃；邱文

来源：江苏大学学报（医学版） 2015 年 25卷 6期