目的:表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)Karp株56?000表面蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性.方法:采用PCR方法,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出56 000成熟蛋白基因片段,将该片段克隆于原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30/56,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达.结果:(1)获得长约1 500 bp的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因;(2)SDS-PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为56?000的独特蛋白带;(3)表达后菌体超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)重组表达质粒序列分析结果显示,pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报道的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因序列基本一致.结论:获得了Ot.Karp 56 000蛋白基因,并在大肠杆菌中实现了表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性.
作者：陈唯军；陈香蕊；牛东升；张雪颖；陈梅玲；魏文进；温博海
来源：军事医学科学院院刊 2003 年 27卷 5期
