目的表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)Gillam株56kDa外膜蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性.方法采用PCR方法,从Ot.Glliam株菌种基因组DNA中扩增出56kDa外膜蛋白基因片段,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30,再用重组质粒转化大肠杆菌,最后用IPTG诱导转化菌,SDS-PAGE和Western-blotting检测重组质粒目的基因的表达.结果 (1)获得长约1500bp的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因,SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量5.6×104处有表达带;(2)DNA测序证明重组质粒pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报告的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因序列基本一致.(3)诱导表达菌体经超声破碎后,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为5.6×104的独特蛋白带,该蛋白约占细菌蛋白总量的29.4
作者：陈唯军；陈香蕊；张雪颖；牛东升；陈梅玲；崔红；魏文进；温博海
来源：中国人兽共患病杂志 2004 年 20卷 4期
