目的:构建shRNA体内表达载体pGenesil-3-siRNA,筛选出抑制Kir6.2基因表达的有效靶序列.方法:以Kir6.2基因为目的基因,以产生shRNA质粒载体pGenesil-3为表达模板,细胞内转录合成2条siRNA,脂质体转染法将shRNA质粒载体pGenesil-3共转染SK-Hep1细胞,将细胞分为SK组(未转染)、HK组(转染阴性对照质粒)、K1组(转染重组质粒K1)和K2(转染重组质粒K2)组.经G418筛选出单克隆进行培养,用RT-PCR和Western Blotting分别检测Kir6.2 mRNA和蛋白的表达,筛选出抑制Kir6.2表达的有效siRNA靶序列.结果:SK、HK、K1和K2组Kir6.2 mRNA表达的相对量分别为0.936±0.042、0.848±0.058、0.225±0.0360、0.171±0.029,K1、K2组Kir6.2 mRNA的表达与HK、SK组比较均明显降低(P＜0.05).SK、HK、K1和K2组的Kir6.2蛋白表达的量分别为0.925±0.045、0.901±0.067、0.269±0.024、0.318±0.031,K1、K2组Kir6.2蛋白的量与HK、SK组比较均明显降低(P＜0.05).结论:shRNA抑制了肝癌细胞Kir6.2基因的表达.
作者：苏晓通；梁平；李靖；丁生才；杨彤翰
来源：西南国防医药 2008 年 18卷 3期
