目的 构建L-苯丙氨酸高产工程菌株,并比较甘油和葡萄糖两种碳源对工程菌产L-苯丙氨酸的影响.方法 PCR克隆glpK基因,改变其核糖体结合位点(RBS)序列,分别与载体pZE12-AF连接,得到pZE12-AF-RBS Ⅰ-glpK和pZE12-AF-RBSⅡ-glpK两个重组质粒,再将它们分别导入E.coli MG△观察其 SDS-PAGE蛋白电泳;采用HPLC法检测在不同碳源中L-苯丙氨酸的产量.结果工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅠ-glpK中甘油激酶表达量较工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅡ-glpK有所提高;以甘油为碳源时,工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅡ-glpK的L-苯丙氨酸产量分别是工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅠ-glpK的14.16倍,工程菌 E.coli MG△pZE12-AF的3.18倍,E.coli MG△的63.31倍.以甘油为碳源时,工程菌苯丙氨酸产量高于以葡萄糖为碳源时的苯丙氨酸产量.结论 RBS的改变和glpK基因的表达有利于苯丙氨酸产量的提高,甘油较葡萄糖更适宜作为工程菌生长的碳源.
作者：黄坤央；芦佳；赵越；徐琪寿；黄英武
来源：军事医学 2012 年 36卷 2期
