目的 构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响.方法 采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,运用质粒酶切、连接及转化构建重组真核质粒pLV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α,测序鉴定.利用慢病毒包装系统将重组质粒转染人293T细胞,制备病毒悬液转染质粒入肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2中,嘌呤霉素加压筛选,形成稳定转染细胞株后扩大培养,并通过实时定量PCR法和Western Blot法检测转染细胞中TFAP2α的mRNA和蛋白的表达.通过MTS实验、平板克隆实验和细胞周期检测,观察未转染质粒组、转染空载体组和转染重组质粒组细胞增殖和周期的变化.结果 成功构建重组真核质粒pLV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α和稳定转染过表达TFAP2α的786-O和Caki-2细胞株.重组质粒组TFAP2αmRNA表达水平和蛋白表达水平均明显高于未转染组和空载体组(P＜0.05).MTS实验中,重组质粒组490 nm处光吸收值较未转染组和空载体组显著降低(P＜0.05).平板克隆实验中,重组质粒组的平板克隆率较未转染组和空载体组亦显著降低(P＜0.05).与未转染组和空载体组比较,重组质粒组G0/G1期细胞比例显著升高(P＜0.05),S期细胞比例显
作者：马明辉；武翀；赵超飞；姚远新；孟庆禹；罗国雄；张瑜；马鑫；张旭
来源：解放军医学院学报 2016 年 37卷 7期
