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目的 构建pGEX-4T-1/Snapin原核表达载体并在大肠埃希菌中高效表达,以纯化得到Snapin/GST融合蛋白.方法 用RT-PCR从小鼠血小板RNA中扩增Snapin基因.将目的片段装入原核表达载体pGEX-4T-1并转化至大肠埃希菌E.coliDH5α中,经过IPTG诱导,SDS-PAGE及凝胶扫描分析目的蛋白的表达水平.结果 成功获得小鼠Snapin基因并构建得到重组表达质粒pGEX-4T-1/Snapin.筛选获得pGEX-4T-1/Snapin/E.coli DH5α重组转化菌株,诱导表达得到融合蛋白Snapin/GST.结论 成功构建小鼠Snapin原核表达载体,并在E.coli DH5α中高效表达融合蛋白Snapin/GST,为深入研究Snapin蛋白的生物学结构和功能奠定基础.

作者:刘奇;汤俊明

来源:临床检验杂志 2014 年 32卷 10期

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作者:
刘奇;汤俊明
来源:
临床检验杂志 2014 年 32卷 10期
标签:
Snapin基因 基因克隆 原核表达 融合蛋白
目的 构建pGEX-4T-1/Snapin原核表达载体并在大肠埃希菌中高效表达,以纯化得到Snapin/GST融合蛋白.方法 用RT-PCR从小鼠血小板RNA中扩增Snapin基因.将目的片段装入原核表达载体pGEX-4T-1并转化至大肠埃希菌E.coliDH5α中,经过IPTG诱导,SDS-PAGE及凝胶扫描分析目的蛋白的表达水平.结果 成功获得小鼠Snapin基因并构建得到重组表达质粒pGEX-4T-1/Snapin.筛选获得pGEX-4T-1/Snapin/E.coli DH5α重组转化菌株,诱导表达得到融合蛋白Snapin/GST.结论 成功构建小鼠Snapin原核表达载体,并在E.coli DH5α中高效表达融合蛋白Snapin/GST,为深入研究Snapin蛋白的生物学结构和功能奠定基础.