目的 探讨应用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)系统靶向敲除多溴蛋白1(PBRM1)基因对肝癌细胞功能的影响.方法 应用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Huh7细胞的PBRM1基因.采用Sanger测序和蛋白质印迹法(Western blot)检测基因敲除情况.基于转录本测序(RNA-seq)结果,对Huh7敲除(KO)细胞株与Huh7野生(WT)细胞系差异表达基因进行功能富集.采用流式细胞术分析细胞周期的改变.通过CCK-8法和克隆形成实验研究细胞增殖情况.采用不同浓度的γ-干扰素(IFN-γ)处理Huh7-KO细胞株和Huh7-WT细胞系,验证GO富集中IFN-γ应答通路的改变.结果 成功构建PBRM1基因敲除的Huh7细胞株.Huh7-KO细胞株的生长曲线和克隆形成率均显著慢于Huh7-WT细胞系(P<0.0001).Huh7-KO细胞株中下调基因主要与细胞周期相关,上调基因主要与免疫应答相关.Huh7-KO细胞株处于G1期的细胞比例明显高于Huh7-WT细胞系(P=0.0166),而处于S期的细胞比例明显低于Huh7-WT细胞系(P=0.0002).浓度为1000 U/ml的IFN-γ对Huh7-KO细胞株组的细胞抑制作用明显高于Huh7-WT细胞系组(P=0.0091).结论 在Huh7肝癌细胞株中敲除PBRM1可以导致G1/S阻滞从而抑制细胞增殖.高浓度IFN-γ可以更加有效地杀伤PBRM1缺失的肿瘤细胞.
作者：宋金鸽；焦宇辰
来源：临床内科杂志 2020 年 37卷 4期
