目的：探讨靶向P2X7受体（ P2X7R）的小发夹RNA（ shRNA）对人鼻咽癌HONE1细胞增殖、凋亡及信号通路的影响。方法根据预实验结果优化shRNA转染条件，将2条靶向抑制P2X7R基因的shRNA载体片段（ shRNA?1、shRNA?2）分别高效转染HONE1细胞，同时设转染无义序列（ Blank）的空转染组及不进行任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时荧光定量PCR（ QPCR）检测P2X7R表达水平以筛选抑制率高的转染载体用于后续试验。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率，流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡率，QPCR法检测各组凋亡相关基因的mRNA水平，Western blotting检测各组转染96 h后磷脂酰肌醇3?激酶／蛋白激酶B（ PI3K／Akt）通路和Wnt／β?连接素（β?catenin）通路中的蛋白变化。结果转染组的P2X7R mRNA水平均低于空转染组和对照组（ P＜0?05），且选择干扰效率高的shRNA?1载体进行功能学研究；与空转染组和对照组比较，shRNA?1转染组的HONE1细胞增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bid、Bax的mRNA水平均升高，而抗凋亡基因Bcl?2、Mcl?1的mRNA水平均降低，差异有统计学意义（ P＜0?05）；与对照组比较，shRNA?1转染组处理后PI3K／Akt通路中PTEN蛋白水平均升高，而
作者：翁友良；邹爱芳；李跃明；李超；王家强；邱素芳
来源：临床肿瘤学杂志 2016 年 21卷 9期
