目的 构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达.方法 以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA 为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒.经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE及Western Blot对表达产物进行鉴定.结果 PCR法扩增出约1600bp的条带.重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致.重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确.SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应.结论 成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础.
作者:张瑞芹;汤建中;贾伟;魏军;张一琳;徐广贤
来源:宁夏医科大学学报 2013 年 35卷 3期