目的:研究凋亡因子TRAIL结合端粒酶启动子对肿瘤的特异性杀伤作用.方法:刺激人外周血淋巴细胞增殖,提取总RNA.采用RT-PCR扩增IL-2信号肽基因和TRAIL基因的融合基因,并克隆入真核表达载体pGL3-181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL.用Western b10t鉴定喉癌细胞株Hepa2中表达产物.将该重组载体经阳离子脂质体转染入人喉癌细胞株Hepa2中,用电镜观察细胞的形态变化,用流式细胞仪技术(FCM)分析转染后细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果:PCR扩增得到了613 bp的cDNA片断.与GenBank中报道的IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区cDNA序列完全一致,成功构建了重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL.Westem blot结果显示,获得的瞬时转染TRAIL在喉癌细胞Hepa2中特异表达,且能诱导其凋亡.结论:重组真核表达载体pGL3-181h-TERT/TRAIL的成功构建,为肿瘤基因治疗的靶向性提供了可行的理想工具.
作者：陈剑秋；成诗银；张慧中；朱春生；贡振扬
来源：中华肿瘤防治杂志 2006 年 13卷 12期
