目的通过构建人天然Fab段噬菌体抗体库为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法.方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA.轻链PCR产物和质粒载体pComb3经SacⅠ和XbaⅠ酶切,由T4 DNA连接酶连接,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,扩增后提取质粒,构建轻链库.轻链库和重链Fd段PCR产物经XhoⅠ和SpeⅠ酶切,同样方法连接转化XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体全库.酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段.结果提取的淋巴细胞总RNA质量好,部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增.Fab全库库容达5.4×106,酶切证实有插入片段.结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体及从肿瘤组织中提取肿瘤抗原用于免疫治疗奠定基础.
作者：马小兵；畅继武；王海涛；王馨；马腾骧
来源：山东医药 2005 年 45卷 35期
