目的：建立一种简便的皮层神经元原代培养方法，并鉴定其培养效果。方法取出生24 h内的SD大鼠大脑皮层组织，采用胰酶消化法获取神经元细胞悬液，用10％ FBS＋DMEM高糖培养基接种在经多聚赖氨酸包被的培养板中，4 h后全量换用Neurobasal＋2％B27＋0．5 mmol／L谷氨酰胺培养液。培养后采用倒置相差显微镜观察神经元形态变化，连续观察8天。神经元培养7～8天进行免疫荧光染色，于激光共聚焦显微镜下对神经元进行鉴定，计算神经元密度和纯度。结果皮层神经元接种时体积小，透亮，呈圆形，单个散在分布。接种后有少量细胞开始贴壁，2 h左右贴壁较多，少量细胞伸出短小的突起；4 h左右已基本贴壁，大量细胞伸出突起，周围光晕明显；培养3天时神经元突起明显伸长，相互交织，细胞透亮，立体感强，呈圆形、椭圆形、梭形；培养5～6天时神经元体积增大，突起交织成网状；培养7～8天时，神经元细胞体饱满，细胞质透亮，细胞核大而明显，细胞体周围折光性强，立体感好，突起交织成致密的网络结构。经免疫荧光染色后鉴定，分离培养的是神经元，密度1．5×106个／mL，纯度＞90％。结论成功建立了一种操作简便的皮层神经元培养方法，该方法培养的神经元纯度高、密度大，可为今后的相关学科研究提供良好的细胞模型。
作者：唐仕军；赵冬；朱立仓；李晓天；朱文学；杨鹏；王业忠
来源：山东医药 2015 年 48期
