目的 探索低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对转录因子KLF5的表达调控及其在细胞增殖中的作用.方法用低氧(1%O2或低氧模拟物CoCl2)处理293T细胞,通过qPCR和Western blotting检测HIF-1α、KLF5的mRNA和蛋白水平.用shRNA抑制HIF-1α的表达,再用低氧处理293T细胞后检测KLF5的表达水平.在293T细胞中过表达HIF-1α-P2A质粒,然后检测其对KLF5基因启动子驱动的luciferase及KLF5表达水平的影响.在HIF-1 α-P2A过表达的293T细胞转染shKLF5,通过CCK8检测细胞的增殖情况.共同转染KLF5和HRE-luciferase质粒,通过荧光素酶报告系统检测KLF5表达对HIF-1α转录活性的影响.结果 qPCR和Western blotting显示低氧可以稳定HIF-1α蛋白,同时在转录水平增强KLF5的表达;shRNA抑制HIF-1α表达可以抑制低氧诱导的KLF5表达上调,并且过表达外源性HIF-1α可以直接结合KLF5基因的启动子区并上调KLF5的表达;尽管单独过表达HIF-1α-P2A或者抑制KLF5的表达并不影响细胞增殖,但两者同时存在时可以明显促进细胞增殖;KLF5过表达可以明显抑制HIF-1α的转录活性.结论 KLF5是HIF-1α的直接靶基因,HIF-1α在转录水平调控KLF5的表达,而KLF5可能通过抑制HIF-1α的转录活性从而抑制HIF-1α的促增殖作用.
作者:王晓博;王豪雨;姚俊吉;曾琬琴;刘海山;赵克温
来源:上海交通大学学报(医学版) 2016 年 36卷 5期