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目的:探讨周期性牵张应力(cyclic tensile stress,CTS)作用下Kruppel样转录因子5 (Kruppel-like factor 5,KLF5)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)中的表达及其对hPDLCs增殖和成骨分化的影响.方法:酶解组织块法体外培养hPDLCs,对其施加形变率10%,频率0.5 Hz的周期性牵张应力1、4、8、12、24 h,采用RT-PCR和Western印迹法检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白的表达.转染siRNA (si-KLF5)至hPDLCs沉默KLF5表达,RT-PCR检测KLF5 mRNA的表达.同时,将过表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF、FGF2)的pcDNA3.1-FGF2转染至稳定转染si-KLF5的hPDLCs,加力8h后,以CCK8法检测各组细胞的增殖活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,RT-PCR检测成骨分化因子Runx2和Osterix的mRNA表达,Western印迹法检测Runx2、Osterix、FGF2、GSK-3β、P-GSK-3β (ser 9)、β-catenin蛋白的表达.采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析.结果:10% CTS刺激呈时间依赖性地诱导hPDLCs中KLF5 mRNA和蛋白表达.si-KLF5转染可显著抑制10% CTS诱导的hPDLCs的增殖,降低其ALP活性,减少Runx2和Osterix的mRNA和蛋白表达,并抑制FGF2-GSK-3β/β-catenin信号通路的激活;而过表达FGF2

作者:高锦瑜;余小琴;王军强

来源:上海口腔医学 2018 年 27卷 1期

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作者:
高锦瑜;余小琴;王军强
来源:
上海口腔医学 2018 年 27卷 1期
标签:
KLF5 人牙周膜细胞 细胞增殖 成骨分化 KLF5 Human periodontal ligament cells Cell proliferation Osteogenic differentiation
目的:探讨周期性牵张应力(cyclic tensile stress,CTS)作用下Kruppel样转录因子5 (Kruppel-like factor 5,KLF5)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)中的表达及其对hPDLCs增殖和成骨分化的影响.方法:酶解组织块法体外培养hPDLCs,对其施加形变率10%,频率0.5 Hz的周期性牵张应力1、4、8、12、24 h,采用RT-PCR和Western印迹法检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白的表达.转染siRNA (si-KLF5)至hPDLCs沉默KLF5表达,RT-PCR检测KLF5 mRNA的表达.同时,将过表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF、FGF2)的pcDNA3.1-FGF2转染至稳定转染si-KLF5的hPDLCs,加力8h后,以CCK8法检测各组细胞的增殖活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,RT-PCR检测成骨分化因子Runx2和Osterix的mRNA表达,Western印迹法检测Runx2、Osterix、FGF2、GSK-3β、P-GSK-3β (ser 9)、β-catenin蛋白的表达.采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析.结果:10% CTS刺激呈时间依赖性地诱导hPDLCs中KLF5 mRNA和蛋白表达.si-KLF5转染可显著抑制10% CTS诱导的hPDLCs的增殖,降低其ALP活性,减少Runx2和Osterix的mRNA和蛋白表达,并抑制FGF2-GSK-3β/β-catenin信号通路的激活;而过表达FGF2