目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microma-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响.方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定.将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组.采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色.经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P＜0.05).实验组凋亡率(7.13％±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66％±0.15)相比明显增高(P＜0.05).结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点.
作者：颜世举；靳雷；肖春；王鑫；孙聪；张开亮；裘秀春；马保安；范清宇
来源：现代生物医学进展 2013 年 13卷 27期
