目的:运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建EV71类病毒颗粒,并对形成的类病毒颗粒的免疫原性进行初步评价.方法:构建重组杆状病毒表达载体Bacmid-P1-3 CD,转染昆虫细胞sf9细胞系,获得携带EV71病毒结构基因P1和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒AcMNPV-P1-3 CD.采用免疫荧光、Western blot及电镜观察等方法检测重组病毒表达产物及形态学特征.表达产物免疫动物后用ELISA、中和试验的方法对其免疫效果进行初步评价.结果:免疫荧光证明有特异性表达产物,Western blot结果可见大小约为39kDa的VP1特异性条带.电镜结果可观察到大小约为27nm的颗粒.免疫动物的血清ELISA抗体效价为1:776,中和抗体效价为1:588.结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统能共表达EV71的P1和3CD基因,并能形成EV71类病毒颗粒.经初步评价,形成的EV71类病毒颗粒具有较好的免疫原性.
作者：郭莉莉；欧霞；米锴；孙茂盛；李鸿钧
来源：中国生物工程杂志 2013 年 33卷 1期
