通过RT-PCR从经ConA刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛γ干扰素(BoIFN-γ)eDNA,克隆到真核载体 pVAX1中,测序结果显示pVAX1中的插入序列BoIFN-γ基因与已报道序列一致.用重组质粒pVAX1-BoIFN-γ转染COS-7细胞并进行间接免疫荧光试验鉴定,结果显示BoFN-γ在COS-7细胞中得到成功表达.将BoIFN-γ基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+),pGEX-6p-1后,分别转化重组表达菌BL21(DE3)、BL21后,通过对表达条件的优化,SDS-PAGE分析表明两种重组蛋白均可实现可溶性表达,大小分别为23 kDa和43 kDa.将含信号肽BoIFN-γ基因克隆到转座载体pFastBac<'TM>1中并转化DH10Bac,通过位点特异性转座将BoIFN-γ基因整合到穿梭载体Baemid中并通过脂质体转染Sf9昆虫细胞,产生重组杆状病毒rBac-BoIFN-γ,重组病毒传代扩增感染Sf9细胞后,通过间接免疫荧光试验证实BoIFN-γ在杆状病毒系统中获得表达.使用MDBK/VSV细胞系统测定rHis-BoIFN-γ、rGST-BoIFN-γ以及rBac-BoIFN-γ的抗病毒活性,其效价分别到8.389×10<'7>U/mg,6.554×10<'5>U/mg、4.096×10<'4>U/mL,3种具有较高的抗病毒活性重组牛γ,干扰素的获得为其开发应用提供了重要的生物材料.同时使用单克隆抗体5G4和3E6,建立了BolFN-γ的双抗夹心ELISA检测方法并绘制了标准曲线,

作者：徐正中；陈祥；单锋丽；孟闯；孙林；黄金林；潘志明；耿士忠；焦新安

来源：生物工程学报 2011 年 27卷 2期