采用CRISPR/Cas9技术敲除DF-1的黑色素瘤分化相关基因5(melanoma-differentiation-associated gene 5,Mda5),探索Mda5基因对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)复制的影响.通过CRISPR/Cas9技术构建Mda5敲除的DF-1细胞系;实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测病毒感染Mda5敲除细胞后病毒RNA水平、细胞病变情况及抗病毒相关基因mRNA水平等.获得Mda5基因敲除的DF-1细胞;与对照组细胞相比,细胞形态、贴壁能力和增殖能力均无显著性差异;与对照组细胞相比,Mda5基因敲除的DF-1细胞感染IBDV后,IFN-β和PKR表达显著性下调,CH25H的表达和病毒复制水平均无显著性差异;感染NDV后,IFN-β表达和病毒复制水平显著性下调,CH25H表达量显著性上调,PKR表达无显著性差异.CRISPR/Cas9技术建立Mda5敲除的DF-1中,IFN-β虽然显著应答IBDV和NDV感染,但不能显著抑制病毒的复制,说明Mda5并非抗病毒复制的关键模式识别受体.
作者：钟菁；孙玲玲；张姝；蒙园；支怡飞；涂黎晴；徐天鹏；濮黎萍；陆阳清
来源：生物技术通报 2022 年 38卷 11期
