目的:构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达,确定不同形式的RBPMS在细胞中的定位.方法:采用PCR技术从人卵巢cDNA文库中扩增RBPMS基因的几种完整编码序列(命名为RBP1~RBP4),克隆到带绿色荧光蛋白标签的pEGFP-C1表达载体上,转染人胚肾细胞293T,Western印迹鉴定RBPMS的表达,并利用激光共聚焦显微镜观察RBPMS不同剪接体在细胞中的定位.结果:限制性内切酶分析和DNA序列测定表明构建的重组表达载体正确,Western印迹实验证明RBP1~RBP4表达成功.通过激光共聚焦显微镜观察,RBP1/4围绕胞核在核膜的周围呈聚集状分布;RBP2则在细胞质和细胞核中均有分布,但会出现斑点状聚集;RBP3呈半月状紧密分布在细胞核周围;RBPMS中的RNA识别基序缺失后,这种现象消失,与空载体对照类似,在细胞核和细胞质中均有分布.结论:构建并表达了RBPMS基因的真核表达载体,RBPMS不同剪接体及RNA识别基序缺失后具有不同的亚细胞分布模式,提示具有不同的功能.
作者：付洁；王瑜；程龙；徐小洁；张浩；宋海峰；叶棋浓
来源：生物技术通讯 2013 年 1期
