目的重组病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ( viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)在大肠杆菌中表达及纯化.方法以pET32a(+)-vMIP-Ⅱ为重组趋化因子vMIP-Ⅱ克隆基因的表达质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS为表达菌,在IPTG诱导下表达出一个由230个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白(thioredoxin)-vMIP -Ⅱ的融合蛋白(26×103).经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离vMIP-Ⅱ及阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白,以配体结合实验鉴定纯化产物的生物学活性.结果从1 L 发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约4～6 mg.配体结合实验表明,该产物能与CCR5结合[Kd=(10.90±1.07) nmol/L].结论采用本方法可获得高表达、高纯度的具有生物学活性的重组病毒趋化因子vMIP-Ⅱ.
作者：苏青和；郑红
来源：生物医学工程与临床 2003 年 7卷 4期
